* Данный текст распознан в автоматическом режиме, поэтому может содержать ошибки

205 МИКРООРГАНИЗМЫ 206 комбинацией и х : а) удалением атмосферного воздуха ( 0 ) , р а с т в о р е н н о г о в п и т а т . с р е д е , путем к и п я ч е н и я ее с п о с л е д у ю щ и м о г р а ­ ничением в х о ж д е н и я в о з д у х а с н а р у ж и п р и п о м о щ и соответст­ вующей закупорки к у л ь т у р ы ; б) в ы т е ­ снением р а с т в о р е н ­ н о г о в среде в о з ­ духа индиферентным д л я анаэро­ бов г а з о м ; в ) с в я з ы ­ ванием х и м . в е щ е ­ с т в а м и или ф и з . адсорпцией возду­ х а с р е д ы ; г) в ы с а Р и с . 7. м и к р о м а н и п у л я т о р с ы в а н и е м в о з д у х а 2 с пипеткой. и з г е р м е т и Ч ески за­ крытого прибора с к у л ь т у р а м и и из и х питательной среды при помощи воздуш­ ного н а с о с а . К и п я ч е н и е сред п е р е д з а с е в о м («освежение» и х ) в х о д и т в п о с т о я н н у ю т е х ­ нику культивирования анаэробов. К и п я ­ тятся среды, выдерживающие нагревание в Коховском аппарате; продолжительность к и п я ч е н и я п р о б и р о к — 1 0 м и н . , к о л б в 100—• 200 см —20 м и н у т , л и т р о в ы х к о л б — 6 0 м и ­ нут. П р о б и р к и могут быть п р о к и п я ч е н ы в в о д я н о й в а н н е в течение 15 м и н . З а т е м с л е ­ дует быстрое о х л а ж д е н и е сред в с н е г у и л и холодной воде. Д л я уменьшения доступа воздуха применяют запаивание пробирок после з а с е в а (Weinberg, V i g n a l - V e i l l o n ) , а т а к ж е и з о л и р о в а н и е от в о з д у х а ж и д к и х сред слоем ж и д к о г о парафина или вазели­ нового м а с л а ( с т е р и л ь н о г о ) . Д л я н е к о т о р ы х анаэробов достаточно бывает делать посев в т. н а з . «высокие» с р е д ы ( а г а р & с т о л б и к о м , Veillon), в глубокие слои которых доступ атмосферного кислорода ограничен. — Д л я выращивания анаэробов в бескислородной атмосфере б о л ь ш и н с т в о а в т о р о в п о л ь з у е т с я водородом, образующимся в аппарате К и п п а действием серной к-ты на металлический цинк. Водород перед посту­ п л е н и е м в сосуд с к у л ь т у р а м и проходит д л я у д а л е н и я остат­ ков к-ты и 0 через промыв3 2 Р и с . 8. А п п а р а т N o v y д л я а н а э р о б о в . ные с к л я н к и с 10 % - н ы м р а с т в о р о м а з о т н о к и ­ слого свинца и с щелочным раствором п и р о ­ г а л л о л а ( а п п а р а т N o v y ) ( р и с . 8). Вместо К и п повского а п п а р а т а можно п о л ь з о в а т ь с я бом­ бами со с г у щ е н н ы м в о д о р о д о м и л и а з о т о м . Н е о б х о д и м о н а в ы в о д н о й к р а н бомб н а с т а ­ влять предохранительный вентиль, умень­ шающий большое давление, под к-рым газ выходит из бомбы. Д л я п о г л о щ е н и я 0 в п и т а т е л ь н о й среде прибавляют к ней редуцируюпще вещества, 2 напр. виноградный сахар (1—2%), муравьин о к и с л ы й н а т р и й и д р . А д с о р п ц и я 0 дости­ г а е т с я т а к ж е п р и б а в л е н и е м к среде к у с о ч к о в ж и в ы х о р г а н о в (среда п р и э т о м н а л и в а е т с я высоким слоем), богатых кроме того каталазой, к-рая разрушает перекиси, образую­ щиеся в процессе роста анаэробов (печень, почки, мозг, кровь, кусочки куриного бел­ ка). Наиболее употребительные среды д л я анаэробов: печоночный бульон (Kitt-Tarozzi), молоко с кусочками печени, мозговая к а ш и ­ ца, кровяной бульон, сахарный агар с кро­ в ь ю , б у л ь о н с к у с о ч к а м и к у р и н о г о белка.—Н а а д с о р п ц и и 0 в среде ж и в о т н ы м и и р а с т и ­ т е л ь н ы м и т к а н я м и о с н о в а н один и з н о в е й ­ ш и х методов к у л ь т и в и р о в а н и я а н а э р о б о в в обыкновенных закрытых ватными пробка­ ми п р о б и р к а х — с п о с о б Врублевског о ( р и с . 9). В к а ч е с т в е а д с о р б е н т а п р и этом методе н а д н о п р о б и р к и с ж и д к о й с р е д о й (5— 8 см ) о п у с к а е т с я к у с о ч е к в а т ы ( 0 , 1 а ) . Стери­ л и з а ц и я п р и 110° в течение */з часа.—Поглощение О живы­ ми к л е т к а м и происходит в м е т о д е Ф о р т н е р а (Fortner) — в ы р а щ и в а н и е а н а э р о ­ бов н а о д н о й ч а ш к е с а э р о ­ бами: чашка с кровяным ага­ р о м р а з д е л я е т с я н а две п о л о ­ вины путем вырезывания и удаления полоски агара; на о д н о й стороне д е л а е т с я п о с е в В а с . prodigiosus, н а д р у г о й — анаэроба; к р а я чашки зама­ зываются пластелином.—Од­ ним из самых распространен­ н ы х методов я в л я е т с я т а к ж е применение в качестве погло­ тителя 0 свежего щелочного раствора пирогаллола (на 1 г п и р о г а л л о в о й к-ты берется о б ы ч н о 1 см 1 0 % - н о г о р а с т ­ в о р а « К О Н ) . С в е ж е п р и г о т о в ­ Р и с . 9. П р о ленный раствор (обливание % ™ ? ? ^ ? пирогалловой кислоты едким эробов. к а л и в самом приборе) н а л и ­ вается на дно прибора, в который поме­ щ а ю т с я п р о б и р к и ( п р о б и р к а Б у х н е р а , Омелянского) или чашки с разводками анаэро­ бов [ в ы р а щ и в а н и е в э к с и к а т о р е , н а д н о к о ­ т о р о г о н а л и т р а с т в о р п и р о г а л л о л а (Arens)]. Пирогаллол употребляется в комбинации с выкачиванием воздуха из прибора. По­ следнее п р о и з в о д и т с я п р и п о м о щ и в о д я ­ ного или масляного насоса. Водяной на­ сос п р и с о е д и н я ю т к э к с и к а т о р у с к у л ь т у р а ­ ми (на дно н а л и т п и р о г а л л о л ) , снабженно­ му хорошим выводным краном. — Удаление воздуха из каждой засеянной пробирки применяется в т е х н и к е п о В е й нб е р г у . В ы с о к и е п р о б и р к и со средой п о с л е посева перетягиваются в верхней трети (над у р о в н е м среды) н а п л а м е н и г о р е л к и т а к и м образом, чтобы в дальнейшем можно было л е г к о и х в этом месте з а п а я т ь , з а т е м ч е р е з стеклянную трубку, вставленную в пробку, пробирки соединяются с водоструйным на­ сосом ( и л и м а с л я н ы м ) , и в ы к а ч и в а н и е в о з ­ духа происходит около пяти минут; когда среда в пробирке «закипит», легким обогре­ ванием нижней части пробирки (газ пропу­ скается через у з к у ю т р у б к у , металличе2 2 3 а 2 3 а а