* Данный текст распознан в автоматическом режиме, поэтому может содержать ошибки

223 ИММУНОХИМИЯ 224 р у ю щ е й г р у п п о й в нем с и н т е з и р у е т с я б е л о к , имею­ щ и й с т р о е н и е , подобное и л и д о п о л н и т е л ь н о е к с т р у к ­ т у р е этой г р у п п ы . П о э т о м у в о п р о с у имеются с л е д у ю щ и е т е о р и и : 1) А н т и т е л а ц е л и к о м и л и ч а с т и ч н о о б р а з у ю т с я из а н т и г е н о в ( Г . Б у х н е р , 1893, Г. С м и р н о в , 1896, В . Мен у о р и и г , 1930, Г. Р а м о н , 1930, П. И о р д а н , 1940). Н е с о с т о я т е л ь н о с т ь этой т е о р и и д о к а з а н а п р и изуче­ нии соотношения между количеством введенного ан­ т и г е н а и количеством о б р а з у ю щ и х с я антител (на 1 м о л е к у л у а н т и г е н а м о ж е т о б р а з о в а т ь с я более 10 м о л е к у л антитела^, с р а в н е н и и х и м и ч . состава анти­ г е н о в и а н т и т е л , а т а к ж е п р и м е н е н и и изотопного метода. 2) Все о б р а з у е м ы е д а н н ы м о р г а н и з м о м а н т и ­ т е л а ( и л и с п о с о б н о с т ь и х о б р а з о в ы в а т ь ) в том п л и ином виде пред с у щ е с т в у ю т в о р г а н и з м е . С о г л а с в о этим взглядам в организме существуют структуры (теория «радикалов» и л и б о к о в ы х цепей П. Э р л и х а , 1906), м о л е к у л ы г л о б у л и н а (теория Н . Е р н е , 1955), с л у ­ чайно имеющие участки, строение к-рых я в л я е т с я д о п о л н и т е л ь н ы м к строению д е т е р м и н в р у ю щ е й г р у п п ы антигена, или в организме присутствуют группы к л е т о к ( к л о н ы ) с н а с л е д с т в е н н о з а к р е п л е н н о й спо­ с о б н о с т ь ю с и н т е з и р о в а т ь м о л е к у л ы всех видов а н т и ­ тел ( т е о р и я с е л е к ц и и к л о н о в Ф . Б а р н е т а , 1957—59). В в е д е н и е а н т и г е н а п р и в о д и т к отбору и р е з к о м у у в е ­ л и ч е н и ю ч и с л а подобных «радикалов», м о л е к у л гло­ б у л и н а и л и к л е т о к . Т е о р и и Э р л и х а и Е р н е не соот­ ветствуют современным представлениям о структуре и биосинтезе белка. Т е о р и я селекции клонов получила ш и р о к о е р а с п р о с т р а н е н и е , х о т я и не м о ж е т о б ъ я с н и т ь , почему в организме животных существуют клоны к л е т о к , способные о б р а з о в ы в а т ь а н т и т е л а к синтетич. с о е д и н е н и я м , к - р ы е не п о п а д а л и в о р г а н и з м ж и в о т н ы х за в с ю и с т о р и ю р а з в и т и я и х вида. 3) Введение анти­ гена ж и в о т н ы м и з м е н я е т синтез б е л к а . Р я д исследо­ в а т е л е й п р и з н а е т , ч т о д е т е р м и н и р у ю щ а я г р у п п а анти­ г е н а , подобно ш т а м п у , о к а з ы в а е т в л и я н и е н а синтез каждой молекулы антитела, обеспечивая появление в них участков с дополнительной структурой ( м а т ­ р и ч н ы е т е о р и и ) . Первоначально сторонники м а т р и ч н о й т е о р и и п р е д п о л а г а л и , что а н т и г е н в л и я е т яа синтез пептидных цепей (Ф. Брейнл и Ф. Гауров и т ц , 1930). В д а л ь н е й ш е м б ы л о п р и з н а н о , что анти­ ген в л и я е т не на с т р о е н и е п о л и п е п т и д н ы х цепей, но на вторичную и третичную с т р у к т у р у образующихся г л о б у л я р н ы х молекул антитела ( Л . Полинг и Ф. Гауров и т ц , 1940). В о з м о ж н о т а к ж е , что а н т и г е н является ш т а м п о м , на к-ром ч е р е з S — S - с в я з и происходит закрепление вначале лабильной третичной структуры ( Ф . К а р у ш , 1956). М а т р и ч н а я т е о р и я объясняет в о з м о ж н о с т ь о б р а з о в а н и я антител п р о т и в л ю б ы х а н т и г е н о в , о д н а к о и она с т а л к и в а е т с я с с е р ь е з н ы м и т р у д н о с т я м и , т а к к а к имеются м н о г о ч и с л е н н ы е ф а к т ы , свидетельствующие в пользу представлений о непря­ мом в л и я н и и а н т и г е н а на синтез а н т и т е л . Одна из т е о р и й , п р и з н а ю щ и х э т о , исходит и з п р е д п о л о ж е н и я о в о з м о ж н о с т и в л и я н и я введенного а н т и г е н а на с т р у к ­ т у р у д е з о к с и р и б о н у к л е и н о в о й к-ты ( Д Н К ) , что п р и ­ водит к о б р а з о в а н и ю и з м е н е н н ы х м а т р и ц р и б о н у ­ клеиновой к-ты ( Р Н К ) , осуществляющих синтез б е л к о в , в том числе б е л к о в — а н т и г е н о в ( Р . Швит и Р . Оуен, 1957). е Наибольшее количество антител, образующихся в о р г а н и з м е , с о д е р ж и т с я во ф р а к ц и и с ы в о р о т о ч н ы х 7 - г л о б у л и н о в ; они м о г у т п р и с у т с т в о в а т ь т а к ж е и во ф р а к ц и я х Р- и а - г л о б у л п н о в . Д л я л е ч е н и я и профи­ лактики ряда заболеваний применяют сыворотки к р о в и и м м у н и з и р о в а н н ы х ж и в о т н ы х . Ч а с т и ч н о очи­ щенные препараты иммунных глобулинов выделяют и з с ы в о р о т к и и м м у н и з и р о в а н н ы х ж и в о т н ы х методами ф р а к ц и о н и р о в а н и я б е л к о в . Чистые п р е п а р а т ы а н т и ­ тел м о г у т б ы т ь п о л у ч е н ы путем и з б и р а т е л ь н о й ад­ с о р б ц и и антител н е р а с т в о р и м ы м и а н т и г е н а м и и от­ щ е п л е н и е м а н т и т е л от а н т и г е н о в . В к а ч е с т в е н е р а с т ­ воримых антигенов используются бактерии, комплексы а н т и г е н о в с ц е л л ю л о з о й и л и с м о л а м и . Этими мето­ дами в нек-рых случаях удается получить препараты 1 0 0 % - н о й чистоты. А н т и т е л а ч е л о в е к а имеют м о л . в. 160 000 и р а з м е р ч а с т и ц 236 X 3 7 А , о д н а к о в к р о в и о б н а р у ж и в а е т с я нек-рое количество а н т и т е л с м о л . в. 300 000 — 500 000. Антитела с м о л . в . 900 000 п р и с у т с т в у ю т в крови нек-рых животных (лошади, коровы, свиньи). Специфич. способность а н т и т е л в с т у п а т ь в р е а к ц и и с а н т и г е н а м и о б у с л о в л е н а д в у м я о т н о с и т е л ь н о не­ большими участками молекулы антитела — актив­ н ы м и ц е н т р а м и р а з м е р о м в 3—5 а м и н о к и с л о т н ы х о с т а т к о в п о л и п е п т и д н о й цепи. П р и д е й с т в и и прот е о л и т и ч . ферментов на а н т и т е л а у д а е т с я п о л у ч и т ь и м м у н о х и м п ч е с к и а к т и в н ы е ф р а г м е н т ы с м о л . весом о к . 50 000. А к т и в н ы е ф р а г м е н т ы с м о л . в . 50 000 и-даже 13 000, в ы д е л е н н ы е и з ф е р м е н т а т и в н о г о г и д р о л и з а т а кроличьих антител, содержат повышенное количество триптофана. Эти, а т а к ж е н е к - р ы е д р у г и е д а н н ы е дают основание д л я предположений о важной роли остатков триптофана в активном центре аятптел. Вопрос о механизме реакции антител с антигенами еще н е п о л у ч и л п о л н о г о р а з р е ш е н и я . Н е с о м н е н н а , о д н а к о , с у щ е с т в е н н а я р о л ь в этом процессе и о н н ы х , водородных и в а н - д е р - в а а л ь с о в ы х с в я з е й . Р е а к ц и я эта, по к р а й н е й мере, д в у х с т а д и й в а . П е р в а я стадия п р о т е к а е т очень быстро и не с о п р о в о ж д а е т с я видимыми и з м е н е н и я м и . Она х а р а к т е р и з у е т с я д о в о л ь н о сущест­ венным тепловым эффектом АН от 2 до 40 ккал/моль. В т о р а я стадия в з а и м о д е й с т в и я антигена с антителом д л и т с я ч а с а м и . В р а з л и ч н ы х с и с т е м а х о я а может про­ текать по-разному, сопровождаясь п р е ц и п и т а ­ ц и е й (выпадением о б р а з о в а в ш е г о с я к о м п л е к с а в осадок), а г г л ю т и н а ц и е й ( с л и п а н и е м анти­ генных частичек), л и з и с о м (растворением клеток), н е й т р а л и з а ц и е й т о к с и н о в и в и р у с о в и т. п. И м м у н о х и м и я , и и м м у н о л о г и я , методы п р и м е н я ю т с я не т о л ь к о д л я д и а г н о с т и к и з а б о л е в а н и й ( в ы я н л е н и е с п е ц и ф и ч н ы х антител в к р о в и з а б о л е в ш и х ) , но т а к ж е и д л я определения и идентификации белков в слож­ н ы х с м е с я х по и х а н т и г е н н ы м с в о й с т в а м . В а ж н е й ­ шим и м м у н о х и м п ч . методом, п о з в о л я ю щ и м опреде­ л я т ь абсолютное с о д е р ж а н и е а н т и т е л и. а н т и г е н о в в системах, где в р е з у л ь т а т е р е а к ц и и м е ж д у этими в е щ е с т в а м и в ы п а д а е т осадок, я в л я е т с я метод М. Гейд е л ь б е р г е р а . Он основан на о с а ж д е н и и а н т и т е л анти­ геном и о п р е д е л е н и и к о л и ч е с т в а б е л к а , в ы п а в ш е г о в о с а д о к . Б о л е е у н и в е р с а л ь н ы м я в л я е т с я метод о п р е ­ д е л е н и я абсолютного к о л и ч е с т в а а н т и т е л по п р и р о с т у б е л к а на и м м у н о с о р б е н т а х . Ч у в с т в и т е л ь н о с т ь э т и х методов 1—4 мкг а з о т а а н т и т е л . Относительное количество антител может быть определено нахождением наибольшего разведения с о д е р ж а щ е й антитела с ы в о р о т к и ( т и т р р а з в е ­ д е н и я ) , п р и к-ром е щ е в ы я в л я е т с я действие анти­ тел. Ч у в с т в и т е л ь н о с т ь и м м у н о б и о л о г и я , методов мо­ ж е т быть ч р е з в ы ч а й н о б о л ь ш о й (до 0,0002 мкг азота антител). Очень т о н к у ю д и ф ф е р е н ц и р о в к у с л о ж н ы х белковых смесей п о з в о л я е т о с у щ е с т в и т ь к а ч е с т в е н н ы й иммуно­ х и м и я , метод, о с н о в а н н ы й н а в ы я в л е н и и п р е ц и п и т а ­ ции в геле, где п р о и с х о д и т в з а и м о д е й с т в и е а н т и г е н о в и антител, диффундирующих навстречу друг другу. Е щ е б о л ь ш и е в о з м о ж н о с т и дает сочетание этого метода с э л е к т р о ф о р е з о м в а г а р о в о м геле ( и м м у н о э л е к т р о форетич. метод П . Г р а б а р я ) . П о с л е д н и й метод позво­ л я е т в ы я в и т ь в с ы в о р о т к е ч е л о в е к а более 25 б е л к о в ы х ф р а к ц и й , р а з л и ч а ю щ и х с я по а н т и г е н н ы м с в о й с т в а м . Методы И . н а х о д я т в последнее в р е м я п р и м е н е н и е для установления эволюционных связей и различий