* Данный текст распознан в автоматическом режиме, поэтому может содержать ошибки

620 ФЕРМЕНТЫ 680 количество ф е р м е н т о в в з а в и с и м о с т и от р я д а внешних условий может дать совершенно р а з ­ л и ч н ы й э ф ф е к т . Отсюда о б я з а т е л ь н ы м т р е б о в а ­ нием я в л я е т с я в о з м о ж н о е у р а в н и в а н и е в с е х влияющих на активность Ф . факторов (t°, актив­ ная реакция среды, концентрация всех компо­ нентов; в и н ы х с л у ч а я х п р и м е н я е т с я « у р а в н и ­ тельное а к т и в и р о в а н и е » п р и б а в л е н и е м спе­ циальных активаторов и т. д.). Но и при этих условиях л и ш ь в границах определенных коли­ чественных с о о т н о ш е н и й м е ж д у Ф . и с у б с т р а ­ том с о х р а н я е т с я л и н е й н а я з а в и с и м о с т ь м е ж д у количеством Ф . и в е л и ч и н о й в ы з ы в а е м о г о и м эффекта. В д р у г и х с л у ч а я х э т а з а в и с и м о с т ь может п р и о б р е т а т ь в е с ь м а с л о ж н ы й х а р а к т е р ( с р . Борисова правило). И з м е р я е м ы е по д е й с т в и ю к о л и ч е с т в а Ф . не могут быть в ы р а ж е н ы в а б с о л ю т н ы х м е р а х (граммы, м о л и ) , и п р и х о д и т с я п р и б е г а т ь к условным е д и н и ц а м . Т а к к а к действие Ф . з а ­ ключается в ускорении определенного процесса, а характеристикой скорости химического пре­ вращения служит константа скорости реакции, то наиболее с о в е р ш е н н ы м методом к о л и ч е с т в е н ­ ного у ч е т а фермента д о л ж н о я в л я т ь с я о п р е ­ деление к о н с т а н т ы с к о р о с т и к а т а л и з и р у е м о й и м р е а к ц и и . Обычно о д н а к о п о л ь з у ю т с я более п р о ­ стыми п р и е м а м и д л я с у ж д е н и я о с к о р о с т и р е а к ­ ции. З а к р и т е р и й берут и л и к о л и ч е с т в о с у б с т р а ­ та, разложенное за определенный промежуток в р е м е н и , и л и , что п р е д п о ч т и т е л ь н е е (но с л о ж ­ н е е ) , — в р е м я , необходимое д л я п р е в р а щ е н и я определенного количества субстрата; или на­ к о н е ц количество испытуемого ферментного материала, осуществляющее превращение оп­ ределенного количества субстрата за опре­ деленный промежуток времени («принцип убы­ в а ю щ и х р я д о в » — с м . Волъгемута метод и л и Гросс-Фульда метод). О п р е д е л е н н ы е з н а ч е н и я получаемых таким путем величин принимают за «ферментную е д и н и ц у » , и с о д е р ж а н и е Ф . в ы р а ж а е т с я к о л и ч е с т в о м э т и х «единиц» н а единицу о б ъ е м а и л и в е с а (обычно с у х о г о остат­ ка) п р е п а р а т а Ф . Х и м и ч е с к а я п р и р о д а Ф. начинает в ы я с н я т ь с я , и то л и ш ь д л я н е б о л ь ш о г о ч и с л а и х , в с а м ы е последние г о д ы . Основной п у т ь к и з у ч е н и ю ее л е ж и т ч е р е з в ы д е л е н и е Ф . и з есте­ ственного м а т е р и а л а и д а л ь н е й ш у ю о ч и с т к у . Критерием очистки опять-таки служит изме­ рение а к т и в н о с т и : чем ч и щ е п р е п а р а т , тем в ы ш е д о л ж н а быть а к т и в н о с т ь , о т н е с е н н а я к с у х о м у весу, т . е. тем б о л ь ш е «единиц» долясно с о д е р ­ жаться н а п р . в 1 г сухого вещества препарата. Попытки изолировать Ф. х и м . путем, н а п р . получая нерастворимые соединения и х с опре­ д е л е н н ы м и х и м . в е щ е с т в а м и ( д л я этого п ы т а ­ лись использовать нек-рые к р а с к и , к а к сафра­ нин и д р . ) и затем р е г е н е р и р у я и з п о л у ч е н н ы х о с а д к о в а к т и в н ы й Ф . , не д а л и у д о в л е т в о р и ­ т е л ь н ы х р е з у л ь т а т о в . П о э т о м у , а такяее в в и д у чрезвычайной лабильности Ф., д л я изолиро­ вания и очистки и х преимущественно поль­ з у ю т с я ф и з . - х и м . м е т о д а м и , в частности мето­ дом а д с о р п ц и и . А д с о р п ц и о н н ы й п р и н ц и п б ы л впервые с успехом использован Данилевским .для р а з д е л е н и я Ф . п о д ж е л у д о ч н о й ж е л е з ы . Этот метод достиг своего п р е д е л ь н о г о у с о в е р ­ шенствования и разработки к а к практической, так и теоретической в исследованиях Вильштеттера и его ш к о л ы . П р и н ц и п метода с в о д и т с я ic т о м у , что р а с т в о р , с о д е р ж а щ и й Ф . в смеси со в с е в о з м о ж н ы м и п о с т о р о н н и м и в е щ е с т в а м и , к а к это имеет место н а п р . в естественных с е к ­ р е т а х ж е л е з и л и в э к с т р а к т а х (водных, г л и ц е р и ­ н о в ы х ) и з богатого Ф . м а т е р и а л а , подвергают сперва предварительной грубой очистке; кри­ с т а л л о и д ы у д а л я ю т д и а л и з о м , г л а в н у ю массу примесей—осаждением спиртом, ацетоном, у к с у с н о к и с л ы м с в и н ц о м и л и к а к и м и - л и б о ад­ сорбирующими веществами. Затем адсорбируют самый Ф., выбирая характер адсорбента и ус­ л о в и я ( р Н , к о н ц е н т р а ц и и , общий с о с т а в р а с т в о ­ р а ) т а к , чтобы и м е л а место по в о з м о ж н о с т и и з ­ б и р а т е л ь н а я а д с о р п ц и я , т . е. п р е и м у щ е с т в е н н о адсорбировался Ф . , а примеси оставались в р а ­ створе. И з полученного адсорпционного комп­ л е к с а (адсорбата) Ф . и з в л е к а ю т ( э л ю и р у ю т ) п о д ­ ходящими растворителями, опять-таки стре­ м я с ь к и з б и р а т е л ь н о м у освобождению Ф . с т е м , чтобы о д н о в р е м е н н о с ним а д с о р б и р о в а н н ы е п р и м е с и в р а с т в о р не п е р е х о д и л и . П р и м е н я я эти п р о ц е с с ы а д с о р п ц и и и э л ю ц и и с и с т е м а т и ­ чески, в а р ь и р у я адсорбенты и условия, уда­ е т с я в с е б о л ь ш е и б о л ь ш е освобождать фермен­ т ы от п о с т о р о н н и х п р и м е с е й . В качестве а д с о р ­ бентов н а и б о л ь ш е е п р и м е н е н и е п о л у ч и л и с п е ­ циально приготовленные препараты гидроокиси алюминия, каолин, гидроокись железа, уголь и др.; д л я элюирования пользуются растворами а м м и а к а , фосфатов и д р . И м е н н о а д с о р п ц и о н н ы й метод д а л в о з м о ж н о с т ь п о л у ч и т ь н а и б о л е е высоко очищенные препараты Ф . , какие только и з в е с т н ы д о н а с т , в р е м е н и , повысив в н е к о т о ­ р ы х с л у ч а я х и х степень чистоты б о л ь ш е ч е м в 20 ООО р а з по с р а в н е н и ю с и с х о д н ы м м а т е ­ риалом. П р и всем своем с о в е р ш е н с т в е метод этот не п р и в е л к о ж и д а в ш е й с я ц е л и — п о л у ч е н и ю Ф. в чистом, химически индивидуальном со­ с т о я н и и . П р е д е л с т а в и т с я тем о б с т о я т е л ь с т в о м , что н а в ы с ш и х с т у п е н я х о ч и с т к и , с у д а л е н и е м п о с л е д н и х о с т а т к о в « с о п у т с т в у ю щ и х веществ» (Begleitstoffe), н а ч и н а е т с я постепенное и н а к т и в и р о в а н и е Ф . , и т . о . у т р а ч и в а е т с я т о т един­ ственный п р и з н а к , п о к о т о р о м у м о ж н о о б н а р у ­ ж и т ь самое н а л и ч и е Ф . П о в и д и м о м у , если ч а с т ь с о п у т с т в у ю щ и х в е щ е с т в я в л я е т с я просто по­ сторонним, балластным, индиферентным ма­ териалом, то другие оказывают известное а к ­ тивирующее или стабилизирующее действие н а Ф . и у д а л е н и е и х ведет к и н а к т и в и р о в а н и ю последнего. Д а ж е наиболее чистые, получен­ н ы е этим методом п р е п а р а т ы , к а к н а п р . п е р о к с и д а з а В и л ь ш т е т т е р а, н е с о м н е н н о в г л а в н о й массе с о с т о я л и и з и н е р т н о г о , п о с т о р о н н е г о ма­ т е р и а л а , и с о д е р ж а н и е с а м о г о Ф . в н и х , по н е к - р ы м п о д с ч е т а м , м о ж н о о ц е н и т ь не в ы ш е чем в 2 — 3 % . П р е п а р а т и в н ы е методы д а л и , с д р у г о й с т о р о н ы , н о в ы е п р е д с т а в л е н и я об о б ­ щ е й ф и з . - х и м . с т р у к т у р е ч а с т и ц ы Ф . Эту ч а ­ стицу приходится рассматривать к а к комплекс, с о с т о я щ и й и з д в у х к о м п о н е н т о в . Имеется м о ­ л е к у л а Ф . , с о д е р ж а щ а я специфические, к а т а л и ­ тически деятельные х и м . группы, адсорбиро­ в а н н а я н а б о л ь ш о м к о л л о и д а л ь н о м «носителе»; п о с л е д н и й с а м по себе не а к т и в е н , и р о л ь е г о п р е ж д е всего у с м а т р и в а л и в т о м , что о н с т а ­ б и л и з и р у е т , п р е д о х р а н я е т от д е з а к т и в и р о в а н и я лябильную активную группу Ф. Такой комп­ л е к с п р е д с т а в л я е т нечто а н а л о г и ч н о е с л о ж н ы м б е л к а м — п р о т е и д а м , причем с о о т в е т с т в у ю щ и й Ф. играет роль простетической г р у п п ы . Ис­ с л е д о в а н и я новейшего в р е м е н и п о к а з а л и , что к о л л о и д а л ь н ы й носитель в з н а ч и т е л ь н о й , воз­ м о ж н о д а ж е р е ш а ю щ е й м е р е о п р е д е л я е т вели­ чину каталитической активности активной г р у п п ы Ф . и с а м ы й х а р а к т е р е е . Свойства