* Данный текст распознан в автоматическом режиме, поэтому может содержать ошибки
61 МОЧА 62 с восходящим холодильником на водяной бане в течение 4 часов. По охлаждении ней трализуют кислую потемневшую жидкость ид NaOH, пробуя на лакмус (расходуется обыкновенно 38,5—39 см ). В мерительной колбе доводят водой до 100 см , перемешива ют, отмеривают отсюда 25 сж (=5 см перво начально взятой М.) в мерительную колбу па 1 л и дальше поступают, как при определе нии креатинина (см. выше). Определение а м и н о к и с л о т . I . М е т о д С е р е н с е н а основан на формоловом титровании после предварительного удаления фосфатов, карбонатов и аммиа ка. В мерительную колбу на 100 см помеща ют 50 см М., 1 см раствора фенолфталеи на и 2г ВаС1 в порошке. Когда ВаС1 раство рится, добавляют насыщенного раствора гидрокиси бария до покраснения жидко сти и сверх того еще 5 см того же раствора, доливают водой до метки, перемешивают, оставляют на 15 минут и фильтруют через сухой фильтр. 80 см фильтрата берут для определения аммиака по Крюгеру, Рейху и Шиттенгельму (см. выше), освобожденную от N H жидкость смешивают с нескольки ми см приблизительно / НС1, просасыва ют воздух, свободный от С 0 , раствор при помощи свежепрокипяченной воды переме щают в мерительную колбу на 100 см , нейтрализуют на лакмус, доводят до метки водой, свободной от СО . 40 см ( = 16 см первоначальной М.) берут для титрования по Серенсену до сильно красного цвета (3 стадия). Таким путем определяют содержа ние N аминокислот в 16 см М.—П. Ван Слайка метод (см.), основанный на опреде лении свободных N H - групп аминокислот после удаления мочевины при помощи уре азы и образовавшегося N H просасыванием воздуха, нельзя считать достаточно надеж ным в применении к моче. Для определения г и п у р о в о й к-ты предложено много методов. Большая часть их или сложна или дает не только гипуровую к-ту, к-рая иногда может быть в М., а & также и нек-рые другие ароматические к-ты М. Скорее всего можно рекомендовать сле дующие методы: I . М е т о д Б у н г е и Ш м и д е б е р г а (Bunge, Schmiedeberg). 300 см М. подщелачивают содой, фильтру ют, нейтрализуют и выпаривают на водя ной бане до густоты сиропа, к-рый повторно и тщательно извлекают холодным алкого лем. Алкогольные вытяжки выпаривают, полученный остаток смешивают с НС1 и мно гократно (не менее 5 раз) извлекают уксусноэтиловым эфиром. Вытяжки промывают водой, сгущают при невысокой t ° . Получен ный остаток освобождают от бензойной к-ты и других примесей при помощи многократ ного извлечения свежеперегнанным петролейным эфиром*. Нерастворившуюся часть растворяют в небольшом количестве теплой воды, раствор настаивают с животным уг лем, фильтруют и промывные воды выпари вают при t° не выше 50—60°, остаток высу3 3 3 3 3 3 3 2 2 3 3 3 3 n x 2 3 3 3 а 3 a 3 s 3 * Е с л и петролейноэфирные вытяжки выпарить п р и низкой t°, остаток растворить в т е п л о й воде, п р о ф и л ь тровать, фильтрат выпарить п р и н е в ы с о к о й t°, оста т о к высушить н а д с е р н о й к-той и взвесить, то б у д е т о п р е д е л е н о с о д е р ж а н и е б е н з о й н о й к-ты в м о ч е . шивают и взвешивают. Более точные резуль таты получаются, если нерастворившуюся в петролейном эфире часть (см. выше) про кипятить в течение /г ч. 20%-ном растворе NaOH для перевода гипуровой к-ты в бен зойную, подкислить фосфорной к-той и ото гнать образовавшуюся бензойную к-ту с во дяным паром, собирая перегон в раствор со ды. Полученный перегон выпаривают почти досуха, остаток подкисляют соляной к-той, жидкость многократно извлекают петролейным эфиром, петролейноэфирный раствор испаряют при обыкновенной t°, остаток вы сушивают над серной к-той. Умножая най денный вес бензойной к-ты на 1,467, получа ют вес гипуровой к-ты.—II. М е т о д Ф е л ь к е р а (Volcker). 300 см М. выпаривают в тонкостенной стеклянной чашке на водяной бане до / , затем по добавлении 4 з N a H P 0 до консистенции сиропа, прибавляют ного гипса и выпаривают дальше досуха. Остаток измельчают вместе с чашкой и из влекают в экстракционном аппарате в тече ние 6 часов петролейным эфиром, затем, сменив колбу, 10 часов сухим эфиром. Эфир ные вытяжки испаряют при обыкновенной t°, остаток растворяют в воде, обесцвечива ют фильтр водой, фильтрат выпаривают при 50—60° до 1—2 см и оставляют кристалли зоваться. Кристаллы собирают на Гуча тиг ле, промывают небольшим количеством хо лодной воды и несколькими каплями эфира, высушивают и взвешивают. К найденному весу прибавляют по 0,0015 г на 1 см водно го фильтрата (поправка на растворимость гипуровой к-ты в воде). О п р е д е л е н и е п е п т и д н о-с в я з а н ¬ н о г о N , т.е.групп—-СО—NH.—К 50см М., в другой порции к-рой было определено со держание N в виде аминокислот, приливают 5 см п/ соляной к-ты и извлекают гиппуровую к-ту 6 раз уксусноэтиловым эфиром. Кислую водную жидкость кипятят в Кьельдалевской колбе в течение 3 часов с 50 см концентрированной НС1, затем выпаривают на водяной бане, при помощи избытка п раствора NaOH и возможно малого количе ства воды переводят в мерительную колбу на 50 см , добавляют 2 з ВаС1 в порошке и доводят баритовой водой до метки. Сильно щелочную жидкость перемешивают, через 15 минут фильтруют через сухой фильтр. От фильтрата отмеривают 40 см ( = 4 0 см первоначально взятой М.) в мерительную колбу на 100 см , слегка подкисляют HCJ, добавляют еще 5 см n НС1 и обесцвечива ют, добавляя 20 см 6%-ного раствора A g N 0 . При помощи свежепрокипячен. воды дово дят до метки. Из 80 см фильтрата удаляют N H по способу Крюгера, Рейха и Шиттенгельма (см. выше). Освобожденный от N H остаток растворяют в воде, переводят в ме рительную колбу на 100 см , нейтрализу ют и поступают далее, как при определении аминокислот (см. выше). От 100 см жидко сти берут для формолового титрования 50 см (=16 см первоначально взятой М.). Разница в содержании N аминогрупп до и после нагревания М. с НС1 указывает на со держание пептидносвязанного N . х в 3 х 3 a 4 3 3 3 3 5 3 3 2 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 О п р е д е л е н и е о к с и п р о т е и н о в ы х слот сводится к определению N в той фракции, ки где