* Данный текст распознан в автоматическом режиме, поэтому может содержать ошибки

703 КРОВЬ 704 иногда спасти осторожным прибавлением 10%-ного раствора H S 0 до п р е к р а щ е н и я вспенивания и до появления коричневой о к р а с к и (перебалтывание после добавления к а ж д о й капли). П о л у ч е н н у ю смесь филь­ труют через сухой фильтр, обратно выливая на фильтр первые порции фильтрата.—2. П о Б е н е д и к т у и Н ь ю т о н у (Benedict, Newton). Р е а к т и в ы . 1) Р а с т в о р м о л и б д е н о в о к и с л о г о н а т р и я : 2 5 г м о л и б ­ деновой кислоты (химически чистой) к и п я т и т с я с 1 2 5 см п р а с т в о р а N a O H , п о к а не наступит практиче­ ски полного растворения. Полученных! раствор филь­ т р у ю т , ф и л ь т р п р о м ы в а ю т 1 0 0 см воды и о х л а ж д е н ­ н ы й ф и л ь т р а т д о в о д я т в о д о й д о 5 0 0 см . 2) 0,4 п раствор H S 0 - Д л я осаждения белков употребляется заранее приготовленная смесь из р а в н ы х объемов реактивов 1 и 2.—О с а ж д е н и е : 1 объем крови < 5 — 1 0 см ) гемолизируется добавлением 7 объемов в о д ы ; к п о л у ч е н н о м у , р а с т в о р у д о б а в л я ю т 2 см сме­ си реактивов 1 и 2, в с т р я х и в а ю т и фильтруют.— 3. П о Ш е н к у ( S c h e n k ) . Р е а к т и в ы . 1) 5 % - н ы й р а ­ с т в о р H g C l , 2) 2 % - н ы й р а с т в о р Н С 1 . — О с а ж д е- . н и е. К 1 объему К. добавляют 1 объем воды и 2& о б ъ е м а р а с т в о р о в 1 и 2 , тщательно взбалтывают и с п у с т я н е с к о л ь к о ч а с о в (не более 24) ф и л ь т р у ю т . В ф и л ь т р а т е ртуть о с а ж д а ю т с е р о в о д о р о д о м , от к-рого, отфильтровав HgS, освобождаются просасыванием воздуха. Полученный фильтрат м о ж н о концентриро­ вать в ы п а р и в а н и е м в в а к у у м е п р и с л а б о к и с л о й р е ­ акции.—4. П о М и х а е л и с у и Р о н а . О с а ж ­ д е н и е . Разбавив К. 10—15-кратным объемом во­ ды, д о б а в л я ю т 5 %-ный р а с т в о р к о л л о и д н о й г и д р о о к и с и ж е л е з а ( и з р а с ч е т а н а 1 о м К . 4 см раствора гидро­ о к и с и ) и н е с к о л ь к о см 10%-ного раствора MgS0 (можно также прибавить 0,1—0,2 г M g S 0 в порошке). Смесь тщательно в с т р я х и в а ю т ( 2 — 3 мин.) и, дав по­ с т о я т ь 10 м и н . , ф и л ь т р у ю т . Е с л и п о л у ч е н н ы й ф и л ь ­ т р а т е щ е о к р а ш е н ( с о д е р ж и т Н Ь ) , то следует в н о в ь добавить раствор гидроокиси железа для оконча­ тельного о с а ж д е н и я следов белка. П о л у ч е н н ы й п р о ­ з р а ч н ы й фильтрат, подкисленный у к с у с н о й к-той, мо­ жет быть сгущен выпариванием, под уменьшенным давлением. Д л я удаления белка из сыворотки или плазмы нужны меньшие количества гидроокиси же­ л е з а : н а 1 см с ы в о р о т к и 1 см раствора гидроокиси железа.—5. Т р и х л о р у к с у с н о й к-т о й ( 1 0 — 20%-ным раствором). К гемолизированной К. добав­ ляется при постоянном перебалтывании раствор три­ х л о р у к с у с н о й . к-ты в т а к о м к о л и ч е с т в е , ч т о б ы к о н е ч н а я к о н ц е н т р а ц и я т р и х л о р у к с у с й о й к-ты б ы л а н е м е н ь ш е 2 , 5 % ( н а п р . в м е р и т е л ь н у ю к о л б у е м к о с т ь ю в 50 см , • с о д е р ж а щ у ю 2 5 см в о д ы , п о м е щ а е т с я 8 см К.; при постоянном перебалтывании добавляется 12—13 см 1 2 % - н о г о р а с т в о р а т р и х л о р у к с у с н о й к-ты и д о в о д и т с я водой до метки). От в с п е н и в а н и я п р е д о х р а н я ю т до­ б а в л е н и е м о к т и л о в о г о а л г о к о л я (1 к а п л я ) . — 6 . П о Б а н г у . Р е а к т и в ы . В фарфоровую чашку по­ мещают 10 г ф о с ф о р н о м о л и б д е н о в о к и с л о г о натрия, 10 г N a S 0 и 1 5 0 см в о д ы ; д о б а в л я ю т 1 5 — 2 0 к а п е л ь 25 % - н о г о р а с т в о р а N a O H и к и п я т я т в т е ч е н и е 15 м и н . П о охлаждении- содержимое ч а ш к и полностью пере­ водят в двухлитровую мерительную колбу, опола­ с к и в а я н е с к о л ь к о р а з ч а ш к у в о д о й , д о б а в л я ю т 30 а ( 1 6 см ) к о н ц е н т р и р о в а н н о й H S 0 , 0,5 г г л ю к о з ы и доводят до метки в о д о й . — О с а ж д е н и е . Бангов•скон б у м а ж к е ( с м . Банга микрометоды), пропитан­ ной 1 0 0 — 1 2 0 мг К . , д а ю т п о д с о х н у т ь н а воздухе •(около 5 м и н . ) , з а т е м п о м е щ а ю т ее в п р о б и р к у , к у д а наливают реактив Б а н г а в таком количестве, чтобы он полностью покрыл всю б у м а ж к у . Ч е р е з 1 час содер­ жимое пробирки фильтруется. Пользуясь реактивом Банга, м о ж н о конечно осаждать белки К . и не наби­ р а я последнюю н а б у м а ж к у . — 7 . От белков К . м о ж н о освобождаться также у л ь т р а ф и л ь т р а ц и е й . 2 4 3 3 3 2 4 3 3 2 3 3 3 4 4 3 3 3 3 3 3 3 2 4 3 2 4 И з б ы т о к в п р и е м н и к е к-ты, н е с в я з а н н о й N H , в ы д е л я ­ ет, к а к в и д н о и з у р а в н е н и я ( а ) , - э к в и в а л е н т н о е к о л и ­ ч е с т в о с в о б о д н о г о и о д а , к-рое о п р е д е л я е т с я путем тит­ рования гипосульфитом (0).—Различие в количестве см г и п о с у л ь ф и т а (1 э к в и в а л е н т г и п о с у л ь ф и т а соот­ ветствует 1 грамм-атому N ) , и с т р а ч е н н ы х п р и титро­ в а н и и к-ты в п р и е м н и к е п о с л е п е р е г о н к и с л е п о г о о п ы ­ та (контроль) с одной с т о р о н ы и исследуемой ж и д к о ­ сти—с другой, укажет на количество в последней N H , а с л е д о в а т е л ь н о и N ( с м . Иодометрия).— 2 . М ет о д. Ф о л и н а- П о с л е о с а ж д е н и я б е л к о в К . п о Ф о л и н у к 5 см фильтрата, помещенным в п р о б и р к у из иенского стекла с двумя метками (соответствующими 3 5 см и 5 0 см ), д о б а в л я ю т 1 см смеси для минера­ лизации. Нагреванием на небольшом пламени содер­ ж и м о е п р о б и р к и доводится до кипения и кипятится до полного обесцвечивания. П о охлаждении с о д е р ж и ­ м о е п р о б и р к и д о в о д я т в о д о й д о 3 5 см , прибавляют 1 5 см р е а к т и в а Н е с л е р а , ц е н т р и ф у г и р у ю т , е с л и н у ж ­ но, и затем к о л о р и м е т р и р у ю т , с р а в н и в а я с о к р а с к о й стандартного р а с т в о р а (см. н и ж е ) . — П р и г о т о в л е н и е с м е с и д л я с ж и г а н и я (минерали­ з а ц и я ) . К 5 0 см 5 %-ного раствора медного к у п о р о с а д о б а в л я ю т 3 0 0 см 85 % - н о й ф о с ф о р н о й к и с л о т ы . П е ­ р е м е ш а в , д о б а в л я ю т 10 см концентрированной хими­ чески чистой H S 0 . Д л я минерализации пользуют­ с я смесью, разведенной водой (1:1). П о д г о т о в к а д л я к о л о р и м е т р и р о в а н и я с т а н д а р т ­ н о г о р а с т в о р а . 3 см раствора (NH ) S0 [0,4716 г химически чистого < N H ) S 0 в 1 л свободной о т а м м и а к а в о д ы : 1 0 см" р а с т в о р а = 1 мг N ] н а б и р а е т с я в м е р и т е л ь н у ю к о л б у е м к о с т ь ю в 1 0 0 см , куда добав­ л я е т с я 2 см разведенной водой смеси для минерали­ з а ц и и , п р и б л и з и т е л ь н о 6 0 см в о д ы , 3 0 см реактива Н е с л е р а и воды до метки. Реактив Неслера доба­ вляется к исследуемому и к стандартному растворам 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 2 4 3 4 2 4 4 2 4 3 3 3 3 п о в о з м о ж н о с т и о д н о в р е м е н н о . — Р а с ч е т: 2 т . 0 , 3 . Наибольшие величины для R N К. полу­ чают, пользуясь для осаждения белков три­ хлоруксусной к-той, наименьшие—применяя фосфорновольфрамовую к-ту. Различие со­ ставляет около 2 мг на 100 см К. Это коли­ чество N обозначается как п е п т и д н ы й а з о т . — В фильтрате, свободном от белков крови, азот органических соединений и амми­ ака определяется по Кьельдалю (см. Кьельдаля способ). Методы о п р е д е л е н и я остаточ­ ного азота. 3 . 1 0 0 мг% N ( Н — в ы с о т а столба стандартного раство­ ра при колориметрировании,Н!—высота столба ис­ с л е д у е м о й ж и д к о с т и ) . — П р и в е д е н н ы й р а с ч е т действи­ телен п р и с о б л ю д е н и и с о о т н о ш е н и й , у к а з а н н ы х для о с а ж д е н и я белков п о Ф о л и н у , и для дальнейшего х о д а анализа. Н е з н а ч и т е л ь н о о т л и ч а ю т с я от м е т о д а Ф о л и н а м е ­ тоды Ф о л и н а и Дени (Denis), осаждающих белки м е т а ф о с ф о р н о й к-той, А с е л я (Acel), предлагающего работать с меньшими количествами исходного мате­ риала, Григо и Герена (Grigaut, Guerin), осаждающих белки К . т р и х л о р у к с у с н о й к-той, А . и Л . П а л д а д и н ы х , р а б о т а ю щ и х так же, к а к иАсель, с реактивом Н е с л е р а , п р и г о т о в л е н н ы м п о В и н к л е р у . — 3. М е т о д П о д г ор е ц к о й , усовершенствованный Энгельгардтом и Л ю б и м о в о й . Осаждение белков трихлоруксусной кис­ лотой, минерализация фильтрата в Кьельдалевских к о л б а х 50 % - н ы м р а с т в о р о м H S 0 б е з к а т а л и з а т о р а . После с о ж ж е н и я в колбы Кьельдаля, содержащие—од­ на—минерализованную исследуемую жидкость, дру­ г а я — к о н т р о л ь (реактивы без исследуемого фильтрата К . ) , д о б а в л я е т с я п о 5 см в о д ы , н е с к о л ь к о к а п е л ь р а с ­ твора индикатора-метилрота и 2 п раствора NaOH до нейтральной р е а к ц и и . П о с л е добавления в колбы п о 1 см р а с т в о р а N a B r O и 10-минутного с т о я н и я в к а ж д у ю к о л б у п р и б а в л я ю т 0 , 5 см 5 %-ного раствора KJ, 1 см п раствора НС1, несколько капель рас­ т в о р а к р а х м а л а и спустя 3—4 мин. титруют выделив­ шийся иод /?о» р а с т в о р о м гипосульфита. Разли­ ч и е в к о л и ч е с т в е см раствора N a S 0 , пошедших при титровании содержимого контрольных проб (а с и ) и и с с л е д у е м ы х ф см ), даст представление о коли­ честве а м м и а к а и следовательно а з о т а в о взятой для анализа п о р ц и и фильтрата. Р е а к ц и и идут согласно сле­ д у ю щ и м у р а в н е н и я м : к о н т р о л ь н а я п р о б а (не с о д е р ж а ­ щая N H ) — N a B r O + 2К J + 2HC1 = N a B r + Н 0 + + 2KC1+2J; анализируемая проба (содержащая NH )—-2NHз + 3 N a B r O = N + 3 H 0 +3NaBr;так. обр. одна молекула N H соответствует 3 эквивалентам, иода; 1 см / раствора Na S 0 соответству2 4 3 3 3 3 и 3 2 2 3 3 3 S 3 3 2 2 3 3 и 2 0 0 2 2 3 1. М е т о д Б а н г а . Образовавшийся N H ула­ в л и в а е т с я т и т р о в а н н ы м р а с т в о р о м к-ты ( С м . Кьельдаля способ). И з б ы т о к к-ты в п р и е м н и к е о п р е д е л я е т с я иодометрическим или ацидометрическпм титрованием •<1-е т о ч н е е ) . Х о д р е а к ц и и : 3H S0 + 5 K J + K J 0 = 3 K S 0 + 3H 0 + 3J (а) 6J + 6 N a S 0 = 6NaJ + 3Na S 0 (б) S 2 4 3 2 4 2 2 2 2 3 2 4 6 14 008 ет & — — = 0 , 0 2 3 3 мг N . У м н о ж а я р а з н о с т ь ( а - Ъ) см 3x200 на 0,0233, узнаем содержание азота в исследуемой пробе фильтрата.—П р и г о т о в л е н и е щ е л о ч ­ н о г о р а с т в о р а N a B r O : а) основной р а с т в о р : 1 2 0 см 5 % - н о г о р а с т в о р а N a O H , 1 см б р о м а и до 375 о й в о д ы . П р и п р и г о т о в л е н и и н е о б х о д и м о смесь о х л а ж д а т ь с н е г о м и л и х о л о д н о й в о д о й ; б) п е р е д а н а л и ­ з о м к 5 см р а с т в о р а « а » п р и б а в л я ю т 4 5 см / раство­ ра NaOH. 3 3 3 3 3 3 и 1 0 А л ь б у м о з ы как составная часть не­ белкового азота не находятся повидимому в нормальных условиях в К. в предобразованном состоянии; скорее они являются продук­ том обработки К. различными реактивами