* Данный текст распознан в автоматическом режиме, поэтому может содержать ошибки

730 секвеНироваНие метоДом коПироваНия активные полосы. Последовательность нуклеотидов в исходной ДНК-мишени может затем прочитываться прямо с радиоавтограммы. секвенирование принудительное, метод «шотган», м. «выстрела из дробового ружья» * секвеніраванне прымусовае, метад «шатган», м. «выстралу з драбавіка» * shotgun method – см. Принудительное секвенирование, метод. секвенирование прямым подходом * секвеніраванне прамым падыходам * sequencing by direct approach – метод определения последовательности оснований в самой РНК, для чего сначала метят 51или 31-конец молекулы РНК с помощью 32 РО4. Затем меченую цепь расщепляют с помощью ферментов, специфичных к определенным последовательностям. Используя радиографию, получают карту, по ко- быть разделены электрофоретически на специальном геле для секвенирования. Метод позволяет определять до 500 и более оснований за один цикл и не требует большого количества ДНК. секвенирование методом копирования * секвеніраванне метадам капіравання * sequencing by copying technique – метод определения последовательности оснований, при котором вначале синтезируют цепочку ДНК, комплементарную РНК, а затем определяют ее нуклеотидную последовательность. Далее с помощью метода химического расщепления для секвенирования ДНК получают радиоавтограмму. секвенирование по сэнгеру (ферментативный метод) * секвеніраванне па сэнгеру (ферментатыўны метад) * Sanger sequencing (enzymatic method) – техника секвенирования (см.) однонитчатой ДНК. В основе метода – присоединение (отжиг, см.) к однонитчатой ДНК-мишени секвенирующего праймера (см. Праймер) или обратного секвенирующего праймера (обычно синтетических олигонуклеотидов). Реакционная смесь переносится в 4 пробирки, куда добавляются все 4 дезоксинуклеозидтрифосфата, один из которых мечен по 32P. Каждая пробирка содержит разные дидезоксинуклеозидтрифосфаты (ддАТФ, ддСТФ, ддГТФ и ддТТФ). Для синтеза комплементарной копии к однонитчатой последовательности-мишени в пробирки добавляется фрагмент Кленова (см. Кленова фрагмент). В результате происходит удлинение праймера в соответствии с матричной последовательностью. Когда в растущую цепь вместо соответствующего дНТФ в матрице включается ддМТФ, 31конец растущей цепи теряет гидроксильную группу и не может дальше удлиняться: цепь терминируется. В итоге каждая реакционная смесь получит популяцию радиоактивно меченых фрагментов ДНК с общим 51-концом (праймер), но разными 31концами. После окончания реакции ДНК денатурируется, подвергается электрофорезу в тонкослойном полиакриламидном геле (см. Секвенирующий гель) и с помощью радиоавтографии (см.) выявляются радио- Схема секвенирования по Сэнгеру (по Kahl, 1995)