* Данный текст распознан в автоматическом режиме, поэтому может содержать ошибки

524 метоДы ввеДения генов... тившись в провирус. Важно, что при этом вместо коротких концевых повторов (STR) образуются длинные концевые повторы (LTR), содержащие вирусные транскрипционные элементы, промотор, энхансер и др. Важной особенность ретровирусов является также их способность включать в свой геном фрагменты хозяйской ДНК и переносить их из клетки в клетку. Т. обр., ретровирусы – очень удобный объект для генноинженерных манипуляций, и в настоящее время популярной стала методика создания пакующих клеточных линий с их применением. Чтобы получилась пакующая линия клеток, необходимо под действием сигнала упаковки объединить РНК генамишени вирусного вектора и капсидных белков, которые синтезировались на РНК ретровируса в пакующей линии клеток. методы невирусной доставки генов * метады нявіруснай дастаўкі генаў * anvi?al g?n? ta?g?ting ??th?d? – два стратегически разных метода, используемых для переноса генов в условиях отсутствия природных механизмов проникновения через клеточную мембрану: 1) образование липидсвязанных комплексов с ДНК в составе липосом; 2) рецептор-опосредованный транспорт трикомпонентной структуры – ДНК-поликатионлиганд-вирус. Вторая стратегия не вполне соответствует правилам невирусной доставки генов, поскольку применяет вирусы. Ее скорее можно назвать промежуточной стратегией между вирусными и невирусными методами доставки. методы переноса чужеродных генов * метады пераноса чужародных генаў * ali?n g?n? t?an?f?? ??th?d? – использование природных векторов для переноса генов и разработка методов бомбардировки растительных объектов микрочастицами, покрытыми ДНК. Обнаружение естественно происходящего переноса генов почвенными бактериями Agrobact?riu? tu??fsci?ns (см.) и A. rhizog?n?s (см.) было революционным в области генетической трансформации растений и в последующем привело к модификации этого процесса. Созданы и успешно используются так называемые ления ДНК рекомбинантных плазмид: клеточный лизат помещают в агарозный гель (иногда лизис проводят прямо в геле), при этом плазмиды, включившие чужеродную ДНК, из-за увеличенного размера обладают меньшей электрофоретической подвижностью и на этом основании легко идентифицируются. методы введения генов в эмбриональные стволовые клетки * метады ўвядзення генаў ў эмбрыянальныя ствалавыя клеткі * ??th?d? ?f ?t?? c?ll g?n? int??d?c? ti?n – ряд методов трансформации эмбриональных стволовых (ЭС) клеток чужеродной ДНК in vitro. Геном ЭС клеток можно изменить путем переноса хромосомы, гибридизации клеток, слияния микроклеток, таргетинга, кальций-фосфатной преципитацией, инфицированием ретровирусными векторами, микроинъекцией ДНК, а также электропорацией. Наиболее широко применяется метод электропорации, при котором частота стабильных трансформантов составляет 10 –5 –10 –6. На частоту трансформации влияет длина гомологичного участка в генной конструкции и геноме ЭС клеток, а также происхождение (напр., линия мышей) используемых последовательностей ДНК и ЭС клеток. Электропорация (см.) при определенных условиях позволяет получить трансформанты, которые содержат одиночные копии в единичном участке генома. Инфицирование рекомбинантными ретровирусами и интеграция чужеродной ДНК проходит по известному механизму: в один сайт на хромосоме встраивается только одна копия и не происходит перегруппировок встроенного материала. Преимуществом ретровирусных векторов является легкость доставки чужеродной ДНК на различных стадиях развития: предимплантационный эмбрион, постимплантационный эмбрион, клетки зародышевых линий, а недостатком – низкая частота инфицированности и ограничение размеров ДНК, переносимой с их помощью (фрагменты не более 10 кб). Внутри клеток вирусная РНК транскрибируется в ДНК при помощи фермента обратная транскриптаза и встраивается в геном хозяина, превра-