* Данный текст распознан в автоматическом режиме, поэтому может содержать ошибки

442 кассетный мУтагенез ты приводит к вариациям в ферментативной активности от 0,3 до 138% от уровня удельной активности нативного фермента. Анализ показал, что замена M?t222 на аланин, серин или цитозин значительно повышает устойчивость субтилизина к воздействию химических окислителей. Т. обр., методом сайт-направленного мутагенеза можно создавать ферменты, имеющие повышенную термостабильность или устойчивость к окислительной инактивации, а также повышенную удельную активность. Придание таких свойств ферментам имеет большое значение для промышленных процессов. Д. Уэллс и соавт. разработали процедуру К. м. в 1985 г. катаболизм, диссимиляция * катабалізм, дысіміляцыя * catab?li?? ?? di??i?i? lati?n – метаболическое расщепление комплексных, т. е. сложных, молекул (как правило, пищевых продуктов) на более простые, сопровождающееся высвобождением энергии, часть которой выделяется в виде тепла, а часть запасается для нужд клетки в виде АТФ. Продукт такого расщепления – катаболит. Для процессов К. необходимо участие катаболических и сопутствующих им ферментов. К. – процесс, противоположный анаболизму и сопряженный с ним. катаболизма репрессия * катабалізму рэпрэсія * catab?lit? ???????i?n – замедление или остановка синтеза ферментов, участвующих в катаболизме сахаров, при выращивании бактерий в присутствии глюкозы. Бактерии в этих условия не способны усваивать различные углеводы (лактозу, арабинозу, галактозу и т. п.), т. к. глюкоза является более эффективным источником энергии. К. р. вызывается уменьшением уровня циклической АМР в клетке и инактивацией вследствие этого регуляторного САР-белка. катаморфоз, катагенез * катамарфоз, катагенез * cata????h??(i?) ?? catag?n??i? – редукция отдельных органов и их систем в связи с переходом организмов в более простую экологическую среду, определяющая регрессивное направление эволюции (см.). спаривания у гетероталлических дрожжей, согласно которой функционирует либо левый ?-, либо правый ?-локус. Кассета включает молчащие локусы HML-? и HMR-? и расположенный между ними MAT-локус, затем копия локуса HML-? либо HMR-? (но не сам ген) перемещается по типу мобильных генетических элементов в локус MAT и там экспрессируется (см. Экспрессивность). кассетный мутагенез * касетны мутагенез * ?lat??h?ld?? ??tag?n??i? ?? ?it??di? ??ct?d – введение участков узнавания R1 и R2, которые отсутствуют в экспрессирующем плазмидном векторе, в целевую последовательность, находящуюся в составе ДНК фага М13 в непосредственной близости от предполагаемого места введения мутации с 51- и 31-стороны сайт-направленным мутагенезом. После этого ген из ДНК фага М13 перестраивают в экспрессирующую плазмиду. Полученную плазмиду R1 и R2 гидролизуют и добавляют к ней смесь синтетических двухцепочечных сегментов, которые после встройки восстанавливают последовательность гена, за исключением триплета, кодирующего определенную аминокислоту. После трансформации клеток E. coli проводят секвенирование независимых клонов для идентификации плазмид, содержащих разные замены целевого триплета. Данный подход был использован для введения сайт-направленных мутаций в ген субтилизина Bacillus subtilis. Было известно, что субтилизин легко инактивируется при химическом окислении и первичным местом такой инактивации является M?t222. Поэтому решили изучить влияние аминокислотных замен в этом сайте, как на ферментативную активность субтилизина, так и на его устойчивость к химическому окислению. Для этого методом К. м. получили 19 вариантов субтилизина, у которых M?t222 был последовательно замещен всеми другими аминокислотами, используемыми при синтезе белков in vivo. Все 20 форм субтилизина нарабатывали, используя вектор экспрессии, в клетках Bacillus subtilis и изучали свойства полученных вариантов белка. Оказалось, что единичная замена M?t222 на другие аминокисло-