* Данный текст распознан в автоматическом режиме, поэтому может содержать ошибки

164 ВЕКТОРЫ чЕЛНОчНЫЕ (напр., регулированием температуры среды), подбора промотора, регулированием числа копий вектора и концентрации индуктора. Уровень экспрессии оценивается на основании электрофоретического анализа клеточных белков (типа «western» и «northern»), определения биологической активности синтезированного белка и общего уровня транскрипции в рекомбинантных клетках. Принципы конструирования и функционирования В. ч. одинаковы: они должны включать в себя репликоны тех генетических систем, в которых будет происходить репликация челночного вектора. При этом используются области начала репликации генетических элементов, которые автономно существуют во внехромосомном состоянии в природных условиях. Так, обсуждавшийся выше интегрирующий вектор pFH7 B. subtilis, обладает свойствами челночного вектора, поскольку для его конструирования использованы репликоны двух видов бактерий. Более эффективными примерами В. ч. являются плазмидные ДНК, способные реплицироваться в клетках животных, высших растений и низших организмов. Необходимость использования челночных векторов в генной инженерии связана с тем, что наработку векторной ДНК в препаративном количестве для проведения генно-инженерных манипуляций удобнее проводить в бактериальных клетках, тогда как получение биологически активных продуктов клонированных генов высших организмов во многих случаях возможно только в клетках своего или близкого вида, в которых эти гены экспрессируются в природных условиях, т. е. в своем обычном генетическом окружении. Векторы экспрессионные * вектары экспрэсіўныя * expressive vectors – векторы, содержащие в своем составе регуляторные последовательности, обеспечивающие синтез чужеродных белков в клетках хозяина. Векторы эписомные * вектары эпісомныя * episomic vectors – крупные вирусные векторы, не интегрирующиеся в геном реципиента. Векторы эукариот * вектары эўкарыёт * eukaryotic vectors – небольшие молекулы ных клеток. Последствия такого события могут быть выявлены в экспериментах на животных моделях. Существует и такая опасность, как интеграция ретровируса в некоторые клетки, в результате которой может быть инактивирован ген-супрессор опухолеобразования, напр. Это очень редкое, но вполне возможное событие. Однако опасность его не нужно переоценивать, учитывая, что для возникновения реальной опухолевой клетки требуется несколько мутационных событий. Др. серьезными недостатками ретровирусных векторов являются: способность переносить генетический материал только в пролиферирующие клетки; способность индуцировать мутации при случайной интеграции в геном; возможность спонтанной активации онкогена; небольшие размеры переносимой ДНК-вставки (до 8 т. п. н.); сравнительно низкий титр (10 –10 на 1 мл) рекомбинантных вирусных частиц, получаемых для трансдукции (только для лечения ex vivo); необходимость конструирования соответствующих «пакующих» клонов клеток; зависимость уровня экспрессии трансгена от эффекта положения. Векторы челночные, в. бинарные * вектары чаўночныя, в. бінарныя * shuttle vectors – векторы, способные реплицироваться в клетках-хозяевах разных биологических видов. Интегрирующая плазмида pFH7 получена путем объединения двух репликонов, один из которых берет начало от плазмиды pC194 B. subtilis, а др. – от плазмиды pBR322 E. coli, что дает возможность вектору существовать и стабильно реплицироваться в клетках как E. coli, так и B. subtilis. Уровень экспрессии гетерологичного гена зависит от таких факторов, как тип и источник происхождения регуляторных последовательностей, тип кодонов, стабильность и число копий вектора, стабильность образующихся рекомбинантных мРНК и белков, локализация в клетке синтезированных белков, генотип хозяина. Уровень экспрессии можно повысить путем изменения последовательности SD (Shine–Dalgarno), использования мутантов с измененным метаболизмом РНК, изменения кинетики общего метаболизма