* Данный текст распознан в автоматическом режиме, поэтому может содержать ошибки

ВЕКТОРЫ РЕТРОВИРУСНЫЕ и может быть заменен на любой другой ген. Вектор pCaMVCAT является челночным, т. е. может рециплицироваться в клетках как E. coli, так и растений. В первом случае селектируемым маркером служит, как обычно, ген устойчивости к ампициллину. Вектор pCaMVCAT принадлежит к большой группе DMGT-векторов (DNA-mediated gene transfer), осуществляющих опосредованный ДНК-перенос генов в клетки растений. Это означает, что в данном случае перенос генов в клетки растений опосредован ДНК вектора, т. к. они находятся в составе векторной молекулы. Для получения стабильных линий растительных клеток с интегрированными в хромосомы и активно экспрессируемыми рекомбинантными ДНК часто в состав DMGT-векторов вводят дополнительные селектируемые маркеры, которые придают клеткам, включившим экзогенную ДНК, определенный легко обнаруживаемый фенотип. Такими маркерами могут быть, напр., гены неомицинфосфотрансферазы II (NPT II), гигромицинфосфотрансферазы (HPT) и дигидрофолатредуктазы, в результате экспрессии которых клетки приобретают устойчивость к канамицину, гиромицину В или метотрексату соответственно. Чужеродная ДНК вводится в растительные протопласты при использовании общих методов безвекторной трансфекции. Исключительно для получения рекомбинантной ДНК в растениях применяется система, сконструированная на основе агробактерий (см.). Векторы ретровирусные * вектары рэтравірусныя * retroviral vectors – генные конструкции на основе РНК-содержащих вирусов. Они часто используются в генной терапии ex vivo для введения ДНК в пролиферирующие клетки человека. По сравнению с др. типами векторов В. р. обладают уникальной способностью эффективно переносить чужеродные гены и стабильно интегрировать их в геном делящихся соматических клеток. Количество генетической информации, которое может быть перенесено с помощью этих векторов, не очень велико – 8 т. п. н. Это либо небольшой эукариотический ген, либо кДНК. 163 Проникновение ретровирусной частицы в клетку зависит от наличия на поверхности этой клетки специфического для данного ретровируса рецептора. Первый ретровирусный вектор – вирус лейкемии мышей Молони – был экотропным вирусом, т. е. он инфицировал только мышиные клетки, поскольку его ENV-белок узнавал только мышиные рецепторы. После изобретения пакующей линии клеток Yam, в которой последовательности, кодирующие родной экотропный белок оболочки вируса Молони, были замещены геном оболочки из другого, амфотропного вируса Молони, поражающего более широкий спектр хозяев, псевдовирусные частицы приобрели способность проникать в человеческие клетки. В дальнейшем такие пакующие амфотропные линии были усовершенствованы, чтобы увеличить выход вирусных частиц и уменьшить вероятность рекомбинации дефектного ретровируса с клеточными эндогенными ретровирусами. Ретровирусные последовательности для безопасности модифицируют т. обр., что в инфицированных ими клетках вирусные белки не производятся. Это достигается за счет удаления или инактивации всех кодирующих последовательностей вируса. Репликация вирусных векторов может происходить только в специальных «пакующих» клетках, в геном которых встроены все гены, производящие вирусные белки. При введении вирусных векторов в эти клетки образуются вирионы, несущие векторную РНК и способные лишь проникать в клеткимишени, но не размножаться в них. Недостатком этой системы, так же, как и других векторных систем на основе вирусов, является возможность контаминации (загрязнения) производящей клеточной линии нормальным ретровирусом и получения на этой основе компетентного по репликации вектора. Для предотвращения этого необходимо регулярное тестирование «пакующей» линии клеток. Возможна также контаминация ретровирусного вектора клеточными РНК, т. к. некоторые из них могут обратно транскрибироваться и встраиваться в геном трансдуцирован-