* Данный текст распознан в автоматическом режиме, поэтому может содержать ошибки

158 ВЕКТОР pKSV-10 сайтов рестрикции для клонирования требуемой последовательности нуклеотидов. В экспрессирующем векторе полилинкер располагают непосредственно за генетическими элементами, регулирующими транскрипцию (наибольшее значение из них имеют промотор и энхансер), перед сайтом полиаденилирования и терминатором транскрипции. Большинство эукариотических белков приобретают активную форму только после трансляционных модификаций, характерных для эукариотических клеток (гликозилирование, ацетилирование, фосфорилирование и т. д.). Эукариотические системы экспрессии генов приспособлены для высокопродуктивного синтеза специфичных белков. В них также можно исследовать пути биосинтеза и внутриклеточного транспорта белков, выполнять функциональные анализы белков и их мутантов, изучать эукариотические последовательности, контролирующие уровень экспрессии генов. Вектор замещения * вектар замяшчэння * replacement vector – клонирующий вектор на основе фага, в котором фрагмент генома фага замещен фрагментом чужеродной ДНК для клонирования. Векторы замещения обычно делают на основе фага ?. Фрагмент ДНК генома фага ?, который замещается (известный как «балластный» фрагмент), расположен в центре фаговой ДНК и не нужен для литического цикла. Протоколы клонирования, которые используют В. з., часто включают в себя меры предотвращения религирования «балластного фрагмента» и/или идентификации клонов, в которых он замещен чужеродной ДНК. В некоторых векторах «балластный» фрагмент содержит ген ?-галактозидазы. В этом случае нерекомбинантные фаги будут образовывать бляшки голубого цвета на среде, содержащей X-gal, в то время как рекомбинантные фаги (не имеющие ?-галактозидного гена) будут образовывать белые бляшки. В др. векторах присутствие «балластного» фрагмента блокирует литическую инфекцию определенных штаммов бактерий-хозяев. Вектор инсерции * вектар інсерцыі * insertion vector – фаговый клонирующий ровалась клонированная последовательность. Векторная молекула должна также давать организму хозяина некоторый хорошо определяемый фенотип, являющийся либо селективным (напр., устойчивость к антибиотикам), либо легко определяемым (напр., образование бляшек). 4. Математическая величина, характеризующаяся направлением и численным значением. 5. Репликон, используемый при клонировании генов. Удобными векторами служат природные плазмиды небольших размеров, вирусы и бактериофаги. Искусственные В. создают путем объединения фрагментов ДНК из разных источников с помощью ДНКлигаз. Вектор pKSV-10 * вектар pKSV-10 * ve?tor pKSV-10 – структура теоретически возможного эукариотического вектора для экспрессии клонированных генов в клетках животных показывает, что эукариотический вектор сохраняет все основные генетические элементы бактериальных векторов. Это, прежде всего, репликатор (область начала репликации ori), распознаваемый репликативными системами эукариотической клетки. В роли репликатора чаще всего используют соответствующие последовательности нуклеотидов вирусов животных (напр., вируса SV40 или вируса Эпштейна–Барр). Особенностью функционирования такого репликатора является потребность в вирусных белках для инициации репликации. Так, в случае SV40 – это Т-антиген, тогда как у вируса Эпштейна– Барр – белок EBNA (Epstein–Barr nuclear antigen). Чтобы репликация векторов, в которых использованы вирусные репликаторы, осуществлялась без вируса-помощника, получили специальные линии клеток, которые стабильно продуцируют соответствующие вирусные белки. Напр., в клетках линии COS синтезируется Т-антиген вируса SV40, а клетки линии HEP-EBNA-2 экспрессируют ген EBNA. В ряде случаев гены, необходимые для репликации эукариотического вектора, вводят непосредственно в вектор. Так же, как и бактериальный, эукариотический вектор должен содержать один или несколько уникальных