* Данный текст распознан в автоматическом режиме, поэтому может содержать ошибки

48 АЛЛЕЛОСПЕцИфИчЕСКИй ОЛИгОМЕР тантный и нормальный. Образовавшиеся продукты реакции, соответствующие мутантному аллелю и аллелю дикого типа, далее разделяют электрофоретически в гелях, используемых для секвенирования нуклеиновых кислот. Аллелоспецифический олигомер * алеласпецыфічны алігамер * аllele-specific oligo or ASo – особый олигомерный нуклеотид (олиг) для ПЦР, полностью комплементарный одному из аллелей гена и частично – другим его аллелям. Олигомер создан с такой последовательностью нуклеотидов, чтобы он или позволял, или ингибировал проведение гибридизации в той точке, где мутантный аллель отличается от аллеля дикого типа (см. Аллелоспецифическая гибридизация олигонуклеотидов). Аллелоспецифический олигонуклеотидный тест * алеласпецыфічны алігануклеатыдны тэст * allele-specific oligonucleotide testing – метод определения специфической мутации с использованием синтетического сегмента ДНК (олигонуклеотид) по длине приблизительно 20 п. о., который связывается с комплементарной последовательностью в образце ДНК и идентифицирует ее (см. Аллелоспецифическая полимеразная цепная реакция). Аллелотип * алелатып * allelotype – термин, соответствующий термину «генотип», но в применении не к отдельной особи, а к целой популяции. Понятие А. служит для характеристики генетической структуры популяции, размножающейся «в себе». Генетическая структура популяции в каждом отдельном случае может быть получена из относительных частот аллелей каждого гена. При этом надо иметь в виду, что А. популяции можно установить только для тех признаков, тип наследования которых известен. Изменения А. популяции вызываются мутациями, действием отбора, случайным дрейфом генов и миграциями при неполной изолированности популяций друг от друга. Иммигрирующие особи повышают частоту определенных аллелей или привносят в популяцию новые аллели, а мигрирующие – уменьшают и в крайних слу- мя ПЦР резко снижается и при определенных сочетаниях ошибочно спаренных нуклеотидов может отсутствовать вообще. Именно эта особенность ПЦР и лежит в основе метода выявления мутаций с помощью А. ПЦР, иначе иногда называемой аллель-специфической элонгацией праймера (allele specific primer elongation or a. s. p. extension). Схема высокоэффективной А. ПЦР была разработана и использована для диагностики мутации Leiden при тромбофилиях. Эта мутация локализована в экзоне 10 фактора V системы свертывания крови человека и часто ассоциирована с синдромом ее повышенной свертываемости. В соответствии с последовательностью нуклеотидов анализируемого участка генома синтезируют два праймера, 31-концевой нуклеотид одного из которых комплементарен мутантному нуклеотиду матричной ДНК, а у другого – нуклеотиду дикого типа. Для усиления специфичности действия праймеров вблизи их 31-концов вводят некомплементарные матрице нуклеотиды. Для исключения ложноотрицательных результатов в пробах, где продукт ПЦР отсутствует, повышали число циклов ПЦР сверх оптимального. Другой тип универсальных аллель-специфических праймеров содержит 31-концевой нуклеотид, всегда некомплементарный матрице, а мутатный нуклеотид матрицы попадает во внутреннюю часть праймера. В этом случае продукты ПЦР отсутствуют, если в гибриде во внутреннюю часть праймера попадает любой некомплементарный мутантный нуклеотид матричной ДНК вне зависимости от его точной локализации. Такие праймеры позволяют обнаруживать любые точковые мутации в гомозиготном состоянии и у гаплоидных микроорганизмов. Для выявления гетерозиготного состояния анализируемого гена иногда используют мутантный и нормальный праймеры разных размеров, которые различаются по длине их 51концевых последовательностей, полностью комплементарных анализируемой ДНК. В этом случае в процессе ПЦР в реакционную смесь можно одновременно добавлять оба аллель-специфических праймера: му-