* Данный текст распознан в автоматическом режиме, поэтому может содержать ошибки

АгРОБАКТЕРИАЛЬНАЯ ТРАНСфОРМАцИЯ A. rhizogenes и их Ti- или Ri-плазмид для переноса чужеродных генов (ДНК) в реципиентный геном растений. Для этого ДНК сначала клонируется в подходящий вектор (напр., в коинтегративный или бинарный), который чаще всего делается на основе pBR322 (см.) и содержит фланкирующие последовательности из Ti-плазмиды (левый и правый конец Т-ДНК). Такая конструкция трансформируется в к.-л. подходящий штамм E. coli, размножается и переносится в клетки агробактерий. При инкубации агробактерии с протопластами, листовыми дисками или др. частями растения vir-область Ti (Ri)-плазмиды активируется веществами, выделяемыми поврежденными клетками растения (напр., ацетосирингон). В результате T-район с чужеродной ДНК вырезается из плазмиды и копия одной нити Т-ДНК пакетируется с белком, переносится в растительную клетку и там интегрируется в ее ядерный геном. О способности агробактерий вызывать образование корончатых галлов (бактериальный рак), или «бородатых корней», известно давно, однако не были известны причины, вызывающие образование этих морфологических изменений, т. к. тщательные исследования показали, что они могут в дальнейшем развиваться в стерильных условиях и не содержать этих агробактерий. Фактор, вызывающий развитие корончатых галлов, долгое время оставался неизвестным, и его называли «опухолеобразующей причиной». Инфицированные агробактериями клетки начинают быстро и бесконтрольно делиться и синтезировать аналоги аминокислот (опины), являющиеся для них источником углерода и азота. Причиной всех этих изменений является встраивание части огромных кольцевых молекул ДНК (плазмид) этих бактерий (Tiплазмиды Agrobacterium tumefaciens и Riплазмиды A. rhizogenes), т. н. T-ДНК (transfer DNA), в хромосомы клеток растений. Встраиваемая часть плазмидной ДНК агробактерий несет, кроме генов синтеза опинов, гены синтеза фитогормонов и некоторые др. гены, наличие которых и придает этим трансформированным клеткам спо- 23 собность независимо делиться по типу раковых клеток. Т. обр., эти агробактерии являются естественным переносчиком (вектором) генов в клетки растений. При использовании сформировавшихся меристем для агробактериальной трансформации появляется возможность получать трансгенные растения независимо от генотипа, т. к. регенерация растений из меристем является намного более простым приемом по сравнению с их регенерацией из каллуса или соматических зародышей. Применение для меристемы побегов коммерческих сортов хлопчатника показало возможность такой генотипически независимой трансформации. Трудность укоренения трансформированных побегов некоторых сортов может быть преодолена путем их прививки на укорененные подвои. В качестве объектов для инокуляции агробактериями используются также соматические зародыши. Так, при инокуляции соматических зародышей сливы Prunus subhirtella и P. insica ? serula получено более 100 трансгенных линий с генами nptll и uidA (CUS). В механизме интеграции Т-ДНК Agrobacterium tumefaciens и A. rhizogenes важную роль играют ее концевые повторы длиной 25 п. н., которые сами не интегрируются в ДНК растений, однако пограничный участок между Т-ДНК и растительной ДНК во всех изученных случаях находился рядом с повтором или захватывал его крайние нуклеотиды. Для правого повтора показана его абсолютная необходимость для переноса Т-ДНК. При полной или частичной делеции повтора терялась способность Т-ДНК интегрироваться в растительный геном. Если эти концевые повторы представлены в Т-ДНК, то между ними может быть интегрирована любая последовательность, которая будет встроена в ДНК клетки растения. Именно это свойство Т-ДНК использовано генными инженерами при создании экспериментальных векторов для генетической трансформации растений. Нижняя цепь Т-ДНК переносится в клетку растения благодаря процессу, очень напоминающему конъюгативный перенос. Интеграция Т-ДНК включает ил-